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本制品基于Histan II Reverse Transcriptase而开发的即用型预混液。该酶的热稳定性大幅度提高，可耐受高达50℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。

本制品包含gDNA digester和2×Histan II SuperMix plus。gDNA digester可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染，保证后续结果更加可靠。2×Histan II SuperMix plus含有逆转录反应所需的所有组分（Buffer，dNTP，Histan II Reverse Transcriptase，RNase inhibitor，Random primers/Oligo (dT)18 primer mix），只需加入RNA模板和RNase-free ddH2O即可进行逆转录反应，并同时终止gDNA digester的作用，保证cDNA的完整性。

本制品适用于两步法RT-qPCR检测，针对qPCR进行Random primers/Oligo (dT)18 primer的比例优化，使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始，并具有相同的逆转录效率，最大程度保证了qPCR结果的真实性和可重复性。逆转录产物兼容SYBR Green和探针法qPCR，可以根据实验目的，选择UNICON qPCR SYBR Green Master Mix，Hiper qPCR SYBR Green Master Mix或Hiper qPCR TaqMan Probe Master Mix等试剂配合使用，进行高性能的基因表达分析。

• gDNA digester和2×Histan II SuperMix plus含有高浓度的甘油，使用前请短暂离心，吹打混匀。
  
• 2×Histan Ⅱ SuperMix plus含有gDNA digester抑制剂。
  
• 建议RNA是溶于水而不是TE Buffer中，因为TE Buffe会干扰gDNA去除以及逆转录反应。
  
• 可以不经过基因组去除步骤，直接进行逆转录，这样所得到的结果与使用Histan II 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix (货号：SY0291)效果一致。但是请勿将gDNA digester与SY0291中的2×Histan II SuperMix配套使用，因其不含终止gDNA digester反应的成分，会影响反转录和后续的qPCR实验。
  
• 反应液的配制应在冰上操作完成，操作过程应避免RNase污染。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
  
• 本制品仅作科研用途！

• 残留基因组DNA去除
  在RNase free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2min。
  

  成分	用量
  RNase free ddH2O	至10μL
  5×gDNA digester Buffer	2μL
  gDNA digester	1μL
  Total RNA 或mRNA	1ng～5μg* 或1ng～500ng*

  注^*：20μL逆转录反应体系建议Total RNA的投入量不超过1μg。如果目的基因的表达丰度低，最多投入5μg Total RNA，否则RNA投入量过高，可能会超过后续定量PCR的线性范围。
  
• 反转录反应体系配制（20μL体系）
  在第1步的反应管中直接加入2×Histan II SuperMix plus，用移液器轻轻吹打混匀。
  

  成分	用量
  第1步的反应液	10μL
  2×Histan II SuperMix plus	10μL

• 反转录程序设置
  标准程序（适用于微量和常规量的模板量）
  

  温度	时间
  25℃	5min
  42℃	30min
  85℃	5min

  注：反转录温度：推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂模板，可将反转录温度提高到50℃。
  
• 逆转录产物可立即用于qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。